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消除組織培養污染的方法步驟

日期:2018/2/26 17:48:32 點擊次數 1902 發布單位:天義生物谷  錄入:李清

    摘要:高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。

    當重要的組織培養物質污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。

    下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。

    ①在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規細胞傳代的濃度。

    ②分散細胞懸液到多孔培養板中,或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

    ③每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。

    ④確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2-3代。

    ⑤在無抗生素的培養基中培養細胞一代。

    ⑥重復步驟4。

    ⑦在無抗生素的培養基中培養4-6代,確定污染是否以已被消除。

 
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